Dlaczego spektrofotometr musi być ustawiony na określoną długość fali?
Dlaczego spektrofotometr musi być ustawiony na określoną długość fali?

Wideo: Dlaczego spektrofotometr musi być ustawiony na określoną długość fali?

Wideo: Dlaczego spektrofotometr musi być ustawiony na określoną długość fali?
Wideo: Widmo światła widzialnego, długość fali światła 2024, Listopad
Anonim

Po dostosowaniu długość fali na spektrofotometr , ty są zmiana położenia pryzmatu lub siatki dyfrakcyjnej tak, aby różniła się długości fal światła są skierowane na szczelinę. Im mniejsza szerokość szczeliny, tym lepsza zdolność instrumentu do rozdzielenia różnych związków.

W związku z tym, na jakiej długości fali zostanie ustawiony spektrofotometr?

W zależności od zakresu długości fali źródła światła, można go podzielić na dwa różne typy: spektrofotometr UV-widzialny: wykorzystuje światło w zakresie ultrafioletowym (185 - 400 nm) i widzialnym (400 - 700 mil ) widma promieniowania elektromagnetycznego.

Podobnie, dlaczego musisz kalibrować spektrometr za każdym razem, gdy zmieniasz długość fali? Spektrofotometr musi być skalibrowany przeciwko ślepemu rozwiązaniu, więc że pomiary po nim mogą wykorzystać absorbancję roztworu ślepego jako zerową wartość odniesienia. Miara zdolności substancji do pochłaniania światła o określonym długość fali.

na jakiej długości fali należy dokonywać odczytów?

Brać odczyty w odstępach 5 nm trochę przed i po tym długość fali . Na przykład, jeśli maksymalna absorbancja została znaleziona przy 450 nm, to aby uzyskać dokładniejszą czytanie λmax, weź absorbancję odczyty przy 440, 445, 455 i 460 nm.

Dlaczego mierzysz absorbancję roztworu przy 550 nm?

Białka reagują alkalicznie z jonami miedzi rozwiązanie tworząc fioletowy kompleks, który pochłania światło 550 nm . Dlatego przez zmierzenie stężenie kompleksu przy użyciu A550 ( Absorbancja w 550 nm ), ty są także zmierzenie stężenie białka.

Zalecana: