Ile kosztuje przekształcenie podwiązania?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Ostatnio zmodyfikowany: 2023-12-15 23:39

Transformacja . Dodaj między 1-5 µl ligacja mieszanina do kompetentnych komórek na transformacja . Przedłużony ligacja z PEG powoduje spadek w transformacja wydajność (Szybkie Podwiązanie Zestaw). W przypadku dużych konstrukcji (>10 000 pz) zaleca się elektroporację.

Ile produktów do ligacji potrzebuję do transformacji?

Transformacja . Dodaj między 1-5 µl ligacja mieszanina do kompetentnych komórek na transformacja . Przedłużony ligacja z PEG powoduje spadek w transformacja wydajność (Szybkie Podwiązanie Zestaw). W przypadku dużych konstrukcji (>10 000 pz) zaleca się elektroporację.

Następnie pojawia się pytanie, co to jest ligacja i transformacja? W typowym eksperymencie klonowania naukowcy najpierw wstawiają fragment DNA, taki jak gen, do okrągłego fragmentu DNA zwanego plazmidem. Ten krok wykorzystuje enzymy restrykcyjne i ligazę DNA i nazywa się a ligacja . Po ligacja , kolejnym krokiem jest przeniesienie DNA do bakterii w procesie zwanym transformacja.

Następnie można zapytać, ile DNA jest potrzebne do podwiązania?

Całkowite stężenie wektora + wstawka powinno wynosić od 1 do 10 µg/ml dla efektywnego ligacja . Zalecane są stosunki molowe Vector:Insert od 1:1 do 1:10 (typowo 1:3). Jeśli nie jesteś pewien swojego DNA stężeń, wykonać wielokrotne ligacje w różnych proporcjach.

Jak długo można przechowywać reakcję podwiązania?

Podwiązania mogą robić w temperaturze pokojowej lub niższej (pomyśl 12-16°C) przez noc lub nawet przez kilka dni, Jeśli ty są naprawdę zajęci. Możesz także przechowywać podwiązanie w lodówce i wyjmij później, aby kontynuować ligację w temperaturze pokojowej przez jak długie jako niezbędne.