Spisu treści:

Jak ładujesz elektroforezę żelową?
Jak ładujesz elektroforezę żelową?

Wideo: Jak ładujesz elektroforezę żelową?

Wideo: Jak ładujesz elektroforezę żelową?
Wideo: Gel Electrophoresis 2024, Listopad
Anonim

Ładowanie próbek i uruchamianie żelu agarozowego:

  1. Dodać Ładowanie bufor do każdej próbki DNA.
  2. Po zestaleniu umieść agarozę żel do żel skrzynka ( elektroforeza jednostka).
  3. Napełnić żel pudełko z 1xTAE (lub TBE) do żel jest pokryty.
  4. Ostrożnie Załaduj drabina masy cząsteczkowej do pierwszego pasa żel .

W związku z tym, ile DNA trzeba załadować do elektroforezy żelowej?

Ilość DNA do załadowania na studzienkę jest zmienna. Najmniejsza ilość DNA które można wykryć za pomocą bromku etidum wynosi 10 ng. DNA ilości do 100 ng na studzienkę spowodują powstanie ostrego, czystego prążka na zabarwionym bromkiem etydyny żel.

Dodatkowo, dlaczego w elektroforezie żelowej stosuje się bufor zamiast wody? ten bufor jest potrzebny do utrzymania pH roztworu DNA na poziomie zbliżonym do neutralnego, ponieważ może on stać się kwaśny w wyniku elektrolizy. Prądy elektryczne spowodowane przez elektrody mogą powodować woda cząsteczki do dysocjacji i uwalniania jonów H+.

Ludzie pytają też, dlaczego w elektroforezie żelowej stosuje się marker?

Mniejsze fragmenty poruszają się szybciej, a zatem dalej, niż większe fragmenty, gdy przedzierają się przez żel . Dlaczego używany jest znacznik podczas uruchamiania fragmentów przez żel ? A znacznik zawiera fragmenty DNA o znanej wielkości. Markery są prowadzone w każdym żel dla porównania z nieznanymi fragmentami w innych żel pasy.

Ile DNA można zobaczyć na żelu agarozowym?

Bardzo żele agarozowe są wykonane między 0,7% a 2%. 0,7% żel będzie wykazują dobrą separację (rozdzielczość) dużych DNA fragmenty (5–10 kb) i 2% żel będzie pokaż dobrą rozdzielczość dla małych fragmentów (0,2–1 kb).

Zalecana: