Czy istnieją inne metody oczyszczania produktów PCR?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Ostatnio zmodyfikowany: 2023-12-15 23:39

Dla tych aplikacji, które wymagają PCR czyszczenie lub walidacja PCR wyniki, tam są dwa metody ogólnie przestrzegane: Produkt PCR izolacja za pomocą kolumny i żelu oczyszczenie z żelu agarozowego.

Tutaj, jaki rodzaj chromatografii jest używany do oczyszczania produktów PCR?

W celu oczyszczenia produktów PCR stosuje się chromatografię wykluczania rozmiarów. To zatrzymuje małe cząsteczki, takie jak białko, podkłady i nukleotydów, podczas gdy duże cząsteczki, takie jak produkty PCR, są zbyt duże, aby wejść do kulek i przejść przez kolumnę do probówek zbierających.

Jak oczyszczasz DNA? Zasadniczo możesz oczyścić Twój DNA próbki poprzez lizę próbek komórek i/lub tkanek przy użyciu najbardziej odpowiedniej procedury (rozerwanie mechaniczne, obróbka chemiczna lub trawienie enzymatyczne), izolowanie kwasów nukleinowych od zanieczyszczeń i wytrącanie ich w odpowiednim roztworze buforowym.

Dodatkowo, dlaczego oczyszczamy produkt PCR?

Oczyszczenie DNA z PCR reakcja jest zazwyczaj konieczna do dalszego stosowania i ułatwia usuwanie enzymów, nukleotydów, starterów i składników buforowych. Powszechnie stosowane metody wykorzystują kolumny wirowe zawierające matrycę krzemionkową, z którą DNA może być selektywnie wiązane w obecności soli chaotropowych.

Dlaczego DNA musi być oczyszczone?

My czysty w górę DNA z roztworów wodnych w celu usunięcia soli buforowych, enzymów lub innych substancji, które mogą mieć wpływ na dalsze zastosowania. Przykłady obejmują reakcję PCR czysty w górę, czysty się po trawieniach restrykcyjnych i czysty się genomu lub plazmidu DNA zanieczyszczone białkami komórkowymi/odpadami.