Jak obliczane jest stężenie DNA za pomocą spektrofotometru?
Jak obliczane jest stężenie DNA za pomocą spektrofotometru?

Wideo: Jak obliczane jest stężenie DNA za pomocą spektrofotometru?

Wideo: Jak obliczane jest stężenie DNA za pomocą spektrofotometru?
Wideo: Spectrophotometric Determination of Concentration of a Solution 2024, Grudzień
Anonim

Stężenie DNA jest Oszacowany przez pomiar absorbancji przy 260nm, regulacja A260 pomiar mętności ( mierzony przez absorbancja przy 320nm), mnożenie za pomocą współczynnik rozcieńczenia i za pomocą związek, który A260 1,0 = 50 µg/ml czystego dsDNA.

Ludzie pytają też, jak oceniasz koncentrację i czystość DNA?

Oceniać Czystość DNA , zmierz absorbancję od 230 nm do 320 nm, aby wykryć inne możliwe zanieczyszczenia. Najpopularniejszy obliczenia czystości to stosunek absorbancji przy 260 nm podzielony przez odczyt przy 280 nm. Dobra jakość DNA będzie miał A260/A280 stosunek 1,7-2,0.

Podobnie, czym jest dobre stężenie DNA? A dobry jakość DNA próbka powinna mieć A260/A280 stosunek 1,7-2,0 i A260/A230 wyższy niż 1,5, ale ponieważ wrażliwość różnych technik na te zanieczyszczenia jest różna, wartości te należy traktować jedynie jako wskazówkę co do czystości próbki.

W związku z tym, jak NanoDrop oblicza stężenie DNA?

Mnożysz wartość absorbancji przy 260 nm przez stały współczynnik (to 50 dla DNA ) i otrzymujesz Stężenie DNA . Voila. (Ok, to technicznie A260 próbki o grubości 10 mm pomnożonej przez 50; NanoDrop wyraża A260 tak, jakby próbka miała 10 mm grubości, jak w standardowej kuwecie).

Dlaczego musieliśmy użyć spektrofotometru do oceny ilościowej naszego DNA?

A spektrofotometr jest potrafi określić średnie stężenia kwasów nukleinowych DNA lub RNA obecne w mieszaninie, jak również ich czystość. Za pomocą prawo Beer-Lambert it jest możliwe odniesienie ilości zaabsorbowanego światła do stężenia cząsteczki absorbującej.

Zalecana: